血清融化方法:建議產(chǎn)品使用梯度溶解法,將血清從-20℃冰箱取出后,于2-8℃解凍過夜,并在此過程中不時(shí)輕輕搖動(dòng)使之溶解均勻。那么,細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的黑點(diǎn)是污染嗎?
更換依科賽胎牛血清FSP500后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞鏡下觀察有黑點(diǎn),需要肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)液有無混濁的情況出現(xiàn),其次鏡下觀察細(xì)胞中的黑點(diǎn)是否有游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染,微生物則會(huì)大量繁殖,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
1、細(xì)胞生長(zhǎng)過老,破碎的細(xì)胞殘?。?/div>
2、血清等級(jí)不足以維持良好的細(xì)胞生長(zhǎng);
3、配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長(zhǎng);
4、配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格;
5、培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。
更換依科賽胎牛血清FSP500后細(xì)胞出現(xiàn)死亡?培養(yǎng)細(xì)胞的死亡原因有多種情況,常見的有以下幾種:
1、培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)過大;
2、細(xì)胞在凍存或復(fù)蘇過程中損傷;
3、培養(yǎng)液滲透壓不正確;
4、培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積;
5、胰蛋白酶消化過度;
6、微生物污染;
7、細(xì)胞在傳代時(shí)未計(jì)數(shù)、計(jì)活率,可能導(dǎo)致細(xì)胞接種密度過低或過高不能正常鋪瓶生長(zhǎng)。